- Do laboratorium wchodzimy w czystym obuwiu i w ubraniu ochronnym.
- Po wejściu do laboratorium włącz łaźnię wodną na temperaturę 350 C
- Wstaw do łaźni wodnej butelki z wodą destylowaną ( 2 litry).
- Włóż do zlewki o pojemności min. 3 l czysty woreczek.
- Ustaw na wadze zlewkę wytaruj i wlej 1000 g wody destylowanej ogrzanej do temperatury 350 C.
- Wsyp 2 opakowania rozrzedzalnika i dokładnie wymieszaj czystą bagietką.
- Wytaruj wagę i wlej 1000 g wody destylowanej.
- Wstaw zlewkę do łaźni wodnej na minimum 30 minut.
- Przygotuj termos do pobierania nasienia:
- Włóż do termosu woreczek foliowy o pojemności min 3 litry
- Nałóż czysty filtr
- Załóż gumkę
- Zważ na wadze przygotowany termos i zapisz jego ciężar
- Gdy minie 30 minut od momentu wsypania rozrzedzalnika do wody destylowanej można przystąpić do pobierania nasienia.
- Po pobraniu nasienia zważ termos z jego zawartością, odrzucając frakcję galaretowatą.
- Odejmij wagę termosu pełnego (z ejakulatem) od pustego i zapisz wynik.
- Pobierz czystą bagietką kroplę nasienia i połóż ją na ogrzane szkiełko podstawkowe i nakryj ją szkiełkiem nakrywkowym.
- Sprawdź ruchliwość plemników pod mikroskopem, obserwacje prowadzimy max 1 min.
- Wykonaj pomiar gęstości nasienia klinem Karrasa:
- Do klina wlej 9 ml rozcieńczalnika.
- Dolej do klina 1 ml czystego nasienia.
- Dokładnie, lecz ostrożnie wymieszaj zawartość klina obracając go 2-3 krotnie aż roztwór stanie się jednorodny.
- Klin chwyć tak, aby podziałka stanowiła tylną ścianę.
- Do tylnej ściany przyłóż białą kartkę.
- Odczytaj ostatnią wyraźną liczbę.
- Odczytaj gęstość nasienia korzystając z tabeli, dołączonej do klina.
- Przykład: Odczytujemy wartość 65 jako ostatnią widoczną wyraźnie liczbę. Z tabeli wynika, że dla wartości „65″ mamy gęstość 225 milionów w l ml czystego nasienia.
- Włóż pobrane nasienie do łaźni wodnej, aby nie stygło i osiągnęło tę samą temperaturę, co roztwór.
- Oblicz ze wskazań klina Karrasa i wagi uzyskanego nasienia ile możemy przygotować porcji nasienia:
- Ilość porcji nasienia =
- A – masa ejakulatu
- B – szacunkowa ruchliwość plemników
- C – Gęstość nasienia odczytana ze skali Klina Karrasa
- D – Liczba plemników, która powinna być w dawce inseminacyjnej 2,0-2,5 miliarda (w laboratorium o gorszym statusie sanitarnym zalecana jest większa koncentracja 2,6 – 3,0 miliarda plemników lub jeżeli nasienie ma zostać zużyte natychmiast.)
- Gdy uzyskasz wynik z ilością porcji, oblicz ile potrzeba dolać wody do nasienia wg wzoru:
Ilość porcji nasienia mnożymy przez objętość pojedynczego zbiorniczka i od uzyskanej wartości odejmujemy objętość (masę) nasienia:
22 (porcje nasienia) X 95 ml (pojemność pojemniczka) = 2090 – 220 ml = 1870 ml.
- Wykonaj pomiar temperatury nasienia i rozrzedzalnika patrząc, aby różnica przed połączeniem nie była większa jak 10C.
- Włóż nasienie w worku do zlewki i wytaruj wagę.
- Wlej wyliczoną ilość roztworu do nasienia zwracając uwagę by roztwór lał się po ściankach zlewki i nie powodował pienienia.
- Po wlaniu roztworu do nasienia i dokładnym wymieszaniu po kilku minutach należy sprawdzić pod mikroskopem nasienie czy nie doszło do pogorszenia jego właściwości.
- Jeżeli nasienie jest prawidłowe można przystąpić do konfekcjonowania nasienia.
- Ustawiamy odpowiednią ilość buteleczek i po odcięciu jednego rogu woreczka, w którym jest nasienie płynnym ruchem przystępujemy do rozlewania nasienia pilnując, aby nie doszło do spienienia roztworu (lejemy po ściankach).
- Po rozlaniu nasienia do zbiorniczków pozostawiamy je, aby wystygło w temperaturze pokojowej przez około godzinę, następnie wkładamy je do szafy klimatycznej i w temperaturze około 16-170C przechowujemy je do momentu zużycia, jednak nie dłużej jak 5 dni, przy użyciu rozrzedzalnika LD.
- Po zakończeniu prac w laboratorium myjemy wszystkie naczynia, wyłączamy łaźnię wodną, wagę, mikroskop.
- Stałą zasadą powinno być utrzymywanie czystości w laboratorium.
- Należy pamiętać, aby minimum dwa razy dziennie przemieszać nasienie znajdujące się w szafie klimatycznej.
